當前位置： > 投稿>正文

profiling是什么意思，profiling中文翻譯，profiling發(fā)音、用法及例句

2025-09-05 投稿

?profiling

profiling發(fā)音

英：[?pr??fa?l??]　　美：[?pro?fa?l??]

英：　　美：

profiling中文意思翻譯

n. 程序概要分析

動詞profile的現(xiàn)在分詞形式

profiling常見例句

1 、The St. Vincent Amazon panot is only the latest threatened animal to benefit from genetic profiling.───圣文森特亞馬遜鸚鵡只是受益于基因數(shù)據(jù)圖表的最新瀕臨滅絕的動物。

2 、A profiling technique that involves inserting diagnostic probes into the program being profiled.───一種分析方法,該方法需要將診斷探測器**入需要分析的程序。

3 、The DBA can use this profiling information to fine-tune slower procedures that may decrease performance.───DBA可以使用這些分析信息來調(diào)整那些可能會降低性能的較慢的過程。

4 、Previously, profiling Analysis Services showed the time in Coordinated Universal Time (UTC).───以前,探查Analysis Services時顯示的是通用協(xié)調(diào)時間(UTC)。

5 、What exactly is Personality Profiling - Competency Analysis?───什么是人格潛質(zhì)-勝任力分析?

6 、So, this wasn't about proving we could profile.─── 所以這次訓練不是為了證明我們能看透別人

7 、The number of active profiling objects is at the maximum and no more may be started.───使用中的配置文件對象的數(shù)量已到達最大值且無法再啟動任何對象。

8 、And none of her other case profiles fit the profile.─── 而她的其他情況都不符合剖析圖

9 、Explains how to use the built-in profiling tools in the Microsoft Visual Studio 2005 Team System.───介紹如何使用Microsoft Visual Studio 2005 Team System中內(nèi)置的分析工具。

10 、Because this, what I'm about to say is profiling.─── 因為我接下來要說的才是側寫

11 、It is currently being widely focused on the gene expression by transcript profiling and take us rapidly forward in our understanding of plant biological traits.───對植物功能基因組學的研究將有利于我們對基因功能的理解和對植物形狀的定性改造和利用。

12 、You control procedure profiling by user with the sa_server_option procedure.───使用sa_server_option過程來控制用戶的過程分析。

13 、Shanghai Profil Metal Ceiling Co., Ltd.───上海浦飛爾金屬吊頂有限公司。

14 、Because runtime compilation uses profiling data to guide its optimization, the JIT may well optimize the test code differently than it would real code.───因為運行時編譯使用概要數(shù)據(jù)來指導優(yōu)化,所以JIT對測試代碼的優(yōu)化可能不同于對實際代碼的優(yōu)化。

15 、It involves statistics, profiling and pattern recognition, behavioral analysis, time series analysis, predictive modeling, visualization, cause-and-effect studies and more.───它涉及到統(tǒng)計，分析和模式識別，行為分析，時間序列分析，預測建模，可視化，因果的研究等等。

16 、In SMT reflow soldering process,profiling a PCBA is a extremely important step.───在SMT回流焊的整個流程中，為組裝電路板設定合適的溫度分布曲線是十分重要的一個環(huán)節(jié)。

17 、The profiling error of a new type skiving hob with convex curved rake face is analyzed and the change law of profiling error affected by parameters is expounded.───對新型凸曲前刀面刮削滾刀的理論構形誤差進行了全面分析,探討了各特征參數(shù)對構形誤差的影響規(guī)律。

18 、Thus, it appears that measurement of the AVR is an important addition to risk profiling in major causes of morbidity and mortality.───因此，AVR的測量是發(fā)病率和死亡率主要原因的風險預測的重要補充。

19 、With these considerations in mind, the profiling mechanism in UML 2.0 Has been rationalized and its capabilities extended.───基于上述考慮,在UML2.0中的profiling機制已經(jīng)被合理化并且它的性能也已經(jīng)被擴展了。

20 、To benefit, you should have experience with Java software development and the entire software development life cycle, including testing and profiling.───為了從本教程中獲益,您應該具備Java軟件開發(fā)經(jīng)驗并了解整個軟件開發(fā)生命周期,包括測試和分析。

21 、Within two years, many medical centers will probably begin to test expression profiling as a guide to therapy, not just for breast cancer but for other types as well.───兩年之內(nèi)，許多醫(yī)學中心將可能開始進行基因表現(xiàn)型態(tài)的檢查，作為治療的依據(jù)之一；這還會包括其他癌癥在內(nèi)，不限于乳癌。

22 、These tools provide an alternative approach to using the profiling API.───利用這些工具可通過另一種方法來使用分析API。

23 、No offense, but you're not a profiler.─── 無意冒犯可你不是側寫師

24 、Before profiling the application, determine the correct sample event to use for collecting the data.───分析應用程序之前,先確定用于收集數(shù)據(jù)的正確樣本事件。

25 、Starts the performance monitor for sampling profiling.───為取樣分析啟動性能監(jiān)視器。

26 、The ethnic, geographic and racial profiling goes into assembling classes at the top-tier colleges and universities.───一流院校的課堂刻意匯集來自各族裔、區(qū)域與種族的學生。

27 、FL250D is designed for maximum performance in stencil printing and reflow profiling, with the capability of printing up to eight inches per second with squeegees or within an enclosed head.───FL250D在模板印刷和設定回流溫度特性曲線中可以展現(xiàn)出最佳性能,使用橡膠輥軸或使用封閉印刷頭可以達到每秒8英寸的印刷能力。

28 、When the instrumented application is executed, the profiling data is collected.───在執(zhí)行應用程序時,就可以收集相關的分析數(shù)據(jù)。

29 、He's single, retired, and he thinks that a profile picture is literally a profile.─── 他單身退休了而且他以為"側邊欄"就真的要貼側臉像

30 、Therefore this proteomic expression profiling analysis could be applied to the identification and quality control of medicines.───因此，蛋白質(zhì)組表達模式分析可以應用于藥物的鑒定與質(zhì)量控制。

31 、If you disable profiling, the database stops collecting profiling information and the information that it has collected to that point remains on the Profile tab in Sybase Central.───如果禁用分析,數(shù)據(jù)庫將停止收集分析信息,而在此刻之前收集的信息會留在Sybase Central中的[分析]選項卡上。

32 、Profiling enables the generation of automatic decision support data (DSD) to enhance investigation.───仿形使新一代的自動決策支持數(shù)據(jù)（渠務署）加強調(diào)查。

33 、For profiling of extrudant,rubber covering of filter cable of rubber compound,rubber covering of press plate and tinsel,etc.───主要用于橡膠半制品的壓型，混煉膠的過濾電纜的包膠也可用于壓片與金屬絲的包膠等工作。

34 、If your code has profiling marks that are reporting custom data, this view shows the data that was collected.───如果您的代碼具有報告自定義數(shù)據(jù)的分析標記,則此視圖會顯示收集的數(shù)據(jù)。

35 、The profiling state of other threads is not affected.───其他線程的分析狀態(tài)不受影響。

36 、Here's the profile I prepared on him.─── 這是我準備的關于他的分析材料

37 、Sampling is a profiling method by which the process in question is periodically polled to determine the active function.───取樣是一種分析方法,它定期對相關進程進行輪詢,以確定活動函數(shù)。

38 、Genetic Determination of Insulin Resistence by Gene Profiling; a Novel Appoach for Pre-Diabetic Conditions.───基因表達與胰島素抵抗的相關性研究;研究糖尿病前狀態(tài)的新方法。

39 、In their combination, the property of the adjective activates a conceptual zone of the noun, thus profiling the contact points and the link itself.───在兩者的組合中，形容詞的特性激活名詞中的某個概念局域，并使這兩部分及這種關聯(lián)得以彰顯。

40 、Light yellow body hair and long, stripe than疏淡, medial thoracoabdominal and limbs are white hair, a black tail sturdy embellishment Central profiling.───全身毛淡黃而長，斑紋較疏淡，胸腹部和四肢內(nèi)側是白色毛，尾巴粗壯點綴著黑色環(huán)紋。

41 、From now on, in each issue of the newsletter you will find a few downloadable files profiling some of the animals we are currently trying to get adopted.───從現(xiàn)在起，在每一期的電子報，你會發(fā)現(xiàn)數(shù)個檔案，它是我們目前正試圖幫牠們找新家的動物的資料。

42 、Customer Usage Profiling of Office Seating and Development of Fatigue-Based Reliability Specifications Brent Tracy of Herman Miller, Inc.───辦公室座椅的用于使用剖面和基于疲勞的可靠性指標制定。

43 、Profiling starts or stops for all threads in the current process.───為當前進程中的所有線程啟動或停止分析。

44 、Business_Excellence Memberikan layanan konsultasi manajemen. Berisi profil, informasi layanan, program pendidikan, dan daftar pelanggan.───仲鼎科技股份有限公司設計,生產(chǎn)和銷售室內(nèi)外液晶顯示產(chǎn)品.

45 、Powerful and user friendly RIP and excellent ICC profiling system assures vivid and accurate color reproduction.───功能強大且操作簡便的打印輸出軟件，優(yōu)秀ICC色彩管理，準確、生動還原色彩。

46 、Deciding which container to use may require profiling the performance of each container type doing the kinds of operations the application requires.───決定使用哪種容器可能要求剖析各種容器類型完成應用所要求的各類操作的性能。

47 、Profiling evaluates and describes the lines of source code that generate the most frequently executed code, and how much time it takes to execute them.───分析計算并描述生成最頻繁執(zhí)行的代碼的源代碼的各行以及執(zhí)行它們需要用多少時間。

48 、Grey biennial sticks, and that Arendt profiling fracture.───二年生枝灰色，并可見紉紋縱裂。

49 、The Lines View in the available reports drop down box allows you to see specific lines executed during sampling profiling.───可用報告下拉框中的“行”視圖允許您查看取樣分析期間執(zhí)行的具體行。

50 、The Functions view lists functions called during profiling.───函數(shù)視圖列出分析期間調(diào)用的函數(shù)。

51 、You know, of all the profilers I've worked with, you've grown the most, from communications liaison to mother to profiler.─── 我和這么多側寫員共事過你是成長最大的從溝通聯(lián)絡員到母親到側寫師

52 、You profile me again, you'll wish you hadn't.─── 你要是再側寫我你肯定后悔

53 、As a recurring shape shown scrolling across a laptop screen in a genetic profiling program created by Chandra Suresh.───在犯罪現(xiàn)場的游泳池里，一些漂浮著的水管設備形成了這個形狀。

54 、If SET HIDDEN is used, debugging using the stored procedure debugger will not show the function definition, nor will it be available through procedure profiling.───如果使用SET HIDDEN,則使用存儲過程調(diào)試程序進行調(diào)試將不會顯示函數(shù)定義,也無法通過過程分析獲得函數(shù)定義。

55 、Profiling is started or stopped only for the current thread.───只為當前線程啟動或停止分析。

56 、A unique slant, profiling the life of Ado...───主角扮演得很逼真，劇情很緊湊，很精彩的一部片。

57 、Based on the type of profiling data that is generated, you can generate sequence diagrams depicting class interactions, object interactions, or thread interactions.───基于產(chǎn)生的profiling數(shù)據(jù)的類型,你可以生成順序圖表來描述類之間的互動,對象的互動和線程的互動。

58 、The following sections assume that you are already connected to your database as a user with DBA authority and that procedure profiling is enabled.───下面幾節(jié)假定您已經(jīng)作為具有DBA權限的用戶連接到數(shù)據(jù)庫并且過程分析已啟用。

59 、Profiling cancer mutations aims at proiding a molecular portrait of each indiidual tumour sample to aid clinicians in improing diagnosis and tailoring the best therapy to each patient.───剖析癌癥突變的目的在于提供每個患者腫瘤樣本的分子特征，以幫助臨床醫(yī)師為每位患者改進診斷并提供最佳的個體化治療。

60 、We have the ability to tailor our victims right to the prisoner profiles, and get full accessibility to their personality profiles, as well as brainwave mapping.─── 因為有囚犯資料的緣故我能能夠為受害者們量身定做并且有接觸他們?nèi)克饺速Y料的權力以及腦波成像圖

61 、Gloucester Waalker is the leading provider of executive human capital solutions， which specialize in executive search， HR consulting， executive coaching， and personality profiling.───上海信誠顧問有限公司是國內(nèi)最早獲得政府批準的人力資源服務商，十多年來信誠顧問堅持專業(yè)、健、新、取的企業(yè)理念，并根據(jù)人力資源市場的需求，不斷提供高質(zhì)量的服務。

62 、As a result, metabonomics and its many pseudonyms (metabolomics, metabolic profiling, etc.) have exploded onto the scientific scene in the past several years.───代謝組學方法則可為代謝物含量變化與生物表型變化建立直接相關性。

63 、Decision tree algorithms were suitable for profiling because they are visual and easy-to-understand, easily interpretable, and they allow establishment of rules.───決策樹算法適合貌相，因為它們是視覺和易于理解的，很容易解釋，并允許他們建立規(guī)則。

64 、Our results have to be confirmed by others before expression profiling can become a routine part of breast cancer workups.───在基因表現(xiàn)型態(tài)成為乳癌例行檢查的一部分之前，我們的結果還需要他人的驗證。

65 、Profiling is a method of gathering performance data in any development or deployment scenario.───分析是在任何開發(fā)或部署方案中收集性能數(shù)據(jù)的方法。

66 、Returns the name of the user being monitored if procedure profiling for a specific user is turned on.───如果啟用對特定用戶的過程分析,則返回被監(jiān)控的用戶的姓名。

67 、Chinese medicine industry: the end of a sudden huge profil age?───中國醫(yī)藥業(yè):一個暴利時代的結束?

68 、Mining path traversal patterns from Web click streams is important in Web usage mining and Web user profiling.───串流資料變化探勘是本論文的第三個研究主題。

69 、Comment Number or text collected by the profiling mark.───分析標記收集的注釋編號或注釋文本。

70 、Describes the views that can be used to help analyze profiling data.───介紹可用于幫助對分析數(shù)據(jù)進行分析的視圖。

71 、Most modern depots are equipped with a wheel profiling facility known as a wheel lathe.───大部分現(xiàn)代化的車輛段都裝備有車輪整形設備，例如車輪車床。

72 、The Instruction Pointer view allows you to see specific instructions that are executed during sampling profiling.───使用“指針指令”視圖,可以查看在取樣分析期間執(zhí)行的具體指令。

73 、Profiling is only onetenth of what we do.─── 側寫只占我們工作內(nèi)容的十分之一

74 、"Looking at the advances in genetic profiling," says Andriole, "I think this kind of advance is just around the corner.───“看著遺傳特征分析的進展速度，”安德利奧勒，“我認為這種突破指日可待。

75 、Psyco currently does not perform any sort of internal statistics or profiling, and does only minimal optimization of generated machine code.───Psyco現(xiàn)在不執(zhí)行任何類型的內(nèi)部統(tǒng)計或概要分析,只對生成的機器碼進行最小優(yōu)化。

76 、Sun_Motor_Group Dealer mobil. Berisi profil perusahaan, daftar cabang di kota-kota Indonesia, dan informasi produk.───南京國際汽車展覽會提供活動日程、品牌與服務介紹。

77 、Rangel, C., et al. "Modeling T-cell activation using gene expression profiling and state-space models." Bioinformatics 20, no. 9 (2004): 1361-72.───使用基因表達構圖法和狀態(tài)矢量空間模型進行T細胞激活建模〉?！渡镄畔W》，20卷，第9期(2004年)：1361-72頁。

78 、Not applying this function attribute to the profiling functions results in an infinite recursive profiling loop and a lot of useless data.───不要將這個函數(shù)屬性應用到分析函數(shù)上,這樣會導致無限遞歸分析循環(huán)和大量的無用數(shù)據(jù)。

79 、ZHU Guang-wen.Developing profiling drifter to help China join ARGO program [ J].Ocean Technology,2001, 20(2), 18-23.───[3]朱光文.發(fā)展剖面探測浮標技術,支持我國參與ARGO計劃[J].海洋技術,2001,20(2),18-23.

80 、Whole genome profiling of gene expression revealed that there existed 1211 differently expressed genes (DEGs) between two parent strains.───對兩株親本轉(zhuǎn)錄組的研究發(fā)現(xiàn)，兩者之間存在1211個差異表達基因。

81 、It has enhanced file locking code, and supports a special "profiling" performance-analysis running mode.───它具有增強的文件鎖定代碼,并支持一種特殊的“概要”性能分析運行方式。

82 、AliefWeb_com Layanan pembuatan aplikasi komputer, multimedia dan situs web. Berisi profil dan download program versi demo.───國家郵政局利用互聯(lián)網(wǎng)絡為郵政業(yè)界人士和郵政用戶等，提供新聞、信息咨詢和技術服務的專業(yè)門戶網(wǎng)站。

83 、VSPerfReport command line tool is used to create reports using the profiling data gathered.───VSPerfReport命令行工具用于使用收集的分析數(shù)據(jù)創(chuàng)建報告。

84 、It is usually used to start profiling after a SUSPENDONLY option has stopped profiling.───它通常用于在SUSPENDONLY選項停止分析以后啟動分析。

85 、If the performance does not measure up to the requirements / expectations, profiling tools are used to find the performance bottle necks in the system.───如果系統(tǒng)性能不能滿足需求的期望值，那么就要使用剖析工具來找出制約系統(tǒng)性能的瓶頸。

86 、But profiling is not always practical - sometimes for ironic reasons.───但是,剖析并不總是可行的,有時候原因可能很可笑。

87 、Expression profiling might help distinguish subgroups of patients with such disorders as asthma, diabetes or obesity who have special treatment needs.───基因表現(xiàn)型態(tài)將可能有助于把患有氣喘、尿病或肥胖的病人分成子群，各自有不同的治療之需。

88 、They argue that it encourages racial profiling, is too punitive and harms families.───他們認為這種懲罰十分嚴厲，傷害家庭成員，并會助長對種族資料的收集。

89 、Gold is now a star attraction at the American Museum of Natural History in New York City, profiling the connection over time between people and this precious metal.───如今，黃金成了紐約美國自然歷史博物館的最閃光的展品，人類在歷史長河中跟這種貴重金屬結下的不解之緣盡現(xiàn)在游人面前。

90 、Profiling tools enable you to generate small compressed report files that open up quickly.───使用分析工具,可以生成較小的能夠快速打開的壓縮報告文件。

分子鑒定技術發(fā)展歷程？

沃森和克里克提出DNA雙螺旋結構，“生命之謎”被打開，經(jīng)過PCR技術、生物芯片技術、DNA測序技術之后分子診斷正在快速成為人類疾病診斷的最有效方式之一。

發(fā)展四階段

第一階段：利用分子雜交技術進行遺傳病基因診斷：通過嬰兒胚胎期進行產(chǎn)前診斷，超早期預知某些疾病發(fā)生、發(fā)展和預后。1978年著名沒計劃以科學家簡悅威等應用液相DNA分子雜交成功進行了鐮形細胞貧血癥的基因診斷。

第二階段：以PCR為基礎的分子診斷：PMullis發(fā)明PCR技術后迅速發(fā)展，標志著傳統(tǒng)基因診斷發(fā)展到更全面的分子診斷技術。

第三階段：以生物芯片技術為代表的高通量檢測技術：1992年美國Affymetrix制作出第一章基因芯片，標志著分子診斷進入生物芯片技術階段。生物芯片技術解決了傳統(tǒng)核酸印跡雜交技術復雜、自動化程度低、檢測目的分子數(shù)量少、低通量的問題。

第四階段：以NIPT為代表的第二代測序技術：Ronaghi分別于1996年與1998年提出了在固相與液相載體中通過邊合成邊測序的方法-焦**酸測序。目前常見的高通量第二代測序平臺主要有Roche454、IlluminaSolexa、ABISOLiD和LifeIon Torrent等，其均為通過DNA片段化構建DNA文庫、文庫與載體交聯(lián)進行擴增、在載體面上進行邊合成邊測序反應，使得第1代測序中最高基于96孔板的平行通量擴大至載體上百萬級的平行反應，完成對海量數(shù)據(jù)的高通量檢測。

分子鑒定技術發(fā)展歷程？

分子診斷技術是指以DNA和RNA為診斷材料，用分子生物學技術通過檢測基因的存在、缺陷或表達異常，從而對人體狀態(tài)和疾病作出診斷的技術。其基本原理是檢測DNA或RNA的結構是否變化、量的多少及表達功能是否異常，以確定受檢者有無基因水平的異常變化，對疾病的預防、預測、診斷、治療和預后具有重要意義。通俗簡單的講所有基于分子生物學水平的方法學技術都屬于分子診斷技術，比如PCR技術、基因測序技術等等。

PCR技術即聚合酶鏈式反應是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術，基本原理類似于DNA的天然復制過程，由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成：模板DNA的變性，模板DNA與引物的退火(復性)，引物的延伸。重復循環(huán)變性--退火--延伸三過程，就可獲得更多的“半保留復制鏈”，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個循環(huán)需2～4分鐘，2～3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。由1983年美國Mullis首先提出設想，1985年由其發(fā)明了聚合酶鏈反應，即簡易DNA擴增法，意味著PCR技術的真正誕生。簡單講PCR技術本質(zhì)上是針對DNA片段進行擴增放大，通過實時熒光PCR技術使得樣本中DNA含量可以檢測出來。

基因測序技術即測定DNA序列的技術。在分子生物學研究中，DNA的序列分析是進一步研究和改造目的基因的基礎。目前用于測序的技術主要有Sanger等（1977）發(fā)明的雙脫氧鏈末端終止法和 Maxam和 Gilbert（1977）發(fā)明的化學降解法。這二種方法在原理上差異很大，但都是根據(jù)核苷酸在某一固定的點開始，隨機在某一個特定的堿基處終止，產(chǎn)生 A，T，C，G四組不同長度的一系列核苷酸，然后在尿素變性的PAGE膠上電泳進行檢測，從而獲得DNA序列。目前 Sanger測序法得到了廣泛的應用。簡單講基因測序技術是針對DNA片段進行測序和分析，使得DNA序列得以清晰。

下面一起來了解一下分子診斷技術近50年的發(fā)展歷程：

一、基于分子雜交的分子診斷技術

上世紀60年代至80年代是分子雜交技術發(fā)展最為迅猛的20年,由于當時尚無法對樣本中靶基因進行人為擴增,人們只能通過已知基因序列的探針對靶序列進行捕獲檢測。其中液相和固相雜交基礎理論、探針固定包被技術與cDNA探針人工合成的出現(xiàn),為基于分子雜交的體外診斷方法進行了最初的技術儲備。

(一)DNA印跡技術(Southern blot)

Southern[1]于1975年發(fā)明了DNA印跡技術,通過限制性內(nèi)切酶將DNA片段化,再以凝膠電泳將長度不等的DNA片段進行分離,通過虹吸或電壓轉(zhuǎn)印至醋酸纖維膜上,再使膜上的DNA變性與核素標記的寡核苷酸探針進行分子雜交,經(jīng)洗脫后以放射自顯影鑒別待測的DNA片段-探針間的同源序列。這一方法由于同時具備DNA片段酶切與分子探針雜交,保證了檢測的特異性。因此,一經(jīng)推出后便成為探針雜交領域最為經(jīng)典的分子檢測方法,廣為運用于各種基因突變,如缺失、**入、易位等,及與限制性酶切片段長度多態(tài)性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)的鑒定中。Alwine等[2]于1977年推出基于轉(zhuǎn)印雜交的Northern blot技術也同樣成為當時檢測RNA的金標準。

(二)ASO反向斑點雜交(allele-specific oligonucleotide reverse dot blot,ASO-RDB)

使用核酸印跡技術進行核酸序列的雜交檢測具有極高的特異性,但存在操作極為繁瑣,檢測時間長的缺點。1980年建立的樣本斑點點樣固定技術則擺脫了傳統(tǒng)DNA印跡需要通過凝膠分離技術進行樣本固定的缺點。通過在質(zhì)粒載體導入單堿基突變的方法,構建了首條等位基因特異性寡核苷酸探針(allele-specific oligonucleotide,ASO),更使對核酸序列點突變的檢測成為可能。1986年,Saiki[3]首次將PCR的高靈敏度與ASO斑點雜交的高特異性結合起來,實現(xiàn)了利用ASO探針對特定基因多態(tài)性進行分型。其后為了完成對同一樣本的多個分子標記進行高通量檢測,Saiki[4]又發(fā)明了ASO-RDB,通過將生物素標記的特異性PCR擴增產(chǎn)物與固定于膜上的探針雜交顯色,進行基因分型、基因突變的檢測。該法可將多種寡核苷酸探針固定于同一膜條上,只需通過1次雜交反應,即可篩查待檢樣本DNA的數(shù)十乃至數(shù)百種等位基因,具有操作簡單、快速的特點,一度成為基因突變檢測、基因分型與病原體篩選最為常用的技術。

(三)熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization,FISH)

FISH源于以核素標記的原位雜交技術,1977年Rudkin[5]首次使用熒光素標記探針完成了原位雜交的嘗試。在上世紀8090年代,細胞遺傳學和非同位素標記技術的發(fā)展將FISH推向臨床診斷的實踐應用。相比于其它僅針對核酸序列進行檢測的分子診斷技術,FISH結合了探針的高度特異性與組織學**的優(yōu)勢,可檢測**完整細胞或經(jīng)分離的染色體**定的正?；虍惓NA序列;由于使用高能量熒光素標記的DNA探針,可實現(xiàn)多種熒光素標記同時檢測數(shù)個靶點。

如今,FISH已在染色體核型分析,基因擴增、基因重排、病原微生物鑒定等多方面中得到廣泛應用。通過比較基因組雜交(comparative genomic hybridization,CGH)與光譜核型分析(spectral karyotyping,SKY)等FISH衍生技術,使其正在越來越多的臨床診斷領域中發(fā)揮作用。

(四)多重連接探針擴增技術(multiplex ligation dependent probe amplification,MLPA)

MLPA技術于2002年由Schouten等[6]首先報道。每個MLPA探針包括2個熒光標記的寡核苷酸片段,1個由化學合成,1個由M13噬菌體衍生法制備;每個探針都包括1段引物序列和1段特異性序列。在MLPA反應中,2個寡核苷酸片段都與靶序列進行雜交,再使用連接酶連接2部分探針。連接反應高度特異,只有當2個探針與靶序列完全雜交,連接酶才能將2段探針連接成1條完整的核酸單鏈;反之,如果靶序列與探針序列不完全互補,即使只有1個堿基的差別,就會導至雜交不完全,使連接反應無法進行。連接反應完成后,用1對熒光標記的通用引物擴增連接好的探針,每個探針擴增產(chǎn)物的長度都是唯一的。最后,通過毛細管電泳分離擴增產(chǎn)物,便可對把核酸序列進行檢測。由于巧妙地借鑒了擴增探針的原理,MLPA技術最多可在1次反應中對45個靶序列的拷貝數(shù)進行鑒定。

該技術具備探針連接反應的特異性與多重擴增探針雜交的高通量特性。經(jīng)過MRC-Holland公司10余年的發(fā)展,MLPA技術已成為涵蓋各種遺傳性疾病診斷、藥物基因?qū)W多遺傳位點鑒定、腫瘤相關基因突變譜篩查、DNA甲基化程度定量等綜合分子診斷體系,是目前臨床最為常用的高通量對已知序列變異、基因拷貝數(shù)變異進行檢測的方法。

(五)生物芯片

1991年Affymetrix公司的Fordor[7]利用其所研發(fā)的光蝕刻技術制備了首個以玻片為載體的微陣列,標志著生物芯片正式成為可實際應用的分子生物學技術。時至今日,芯片技術已經(jīng)得到了長足的發(fā)展,如果按結構對其進行分類,基本可分為基于微陣列(microarray)的雜交芯片與基于微流控(microfluidic)的反應芯片2種。

1.微陣列芯片

(1)固相芯片:微陣列基因組DNA分析(microarray-based genomic DNA profiling,MGDP)芯片:將微陣列技術應用于MGDP檢測中已有超過十年的歷史,其技術平臺主要分為2類,即微陣列比較基因組雜交(array-based comparative genome hybridization,aCGH)和基因型雜交陣列(SNP array)。顧名思義,aCGH芯片使用待測DNA與參比DNA的雙色比對來顯示兩者間的拷貝數(shù)變異(CNV)的變化,而單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism,SNP)芯片則無需與參比DNA進行比較,直接通過雜交信號強度顯示待測DNA中的SNP信息。隨著技術的不斷進步,目前市場上已出現(xiàn)可同時檢測SNP與CNV的高分辨率混合基因陣列芯片。MGDP芯片主要應用于發(fā)育遲緩、先天性異常畸形等兒童遺傳病的輔助診斷及產(chǎn)前篩查。經(jīng)驗證,使用MGDP芯片進行染色體不平衡檢測與FISH的診斷符合率可達100%[8],表達譜芯片(gene expression profiling array,GEP array):1999年,Duggan等[9]首次使用cDNA芯片繪制了mRNA表達譜信息。隨著表觀遺傳學在疾病發(fā)生發(fā)展中的作用日益得到重視,目前也已出現(xiàn)microRNA芯片、長鏈非編碼RNA(long noncoding RNA,lncRNA)芯片等。類似于MGDP芯片,GEP芯片使用反轉(zhuǎn)錄后生成的cDNA文庫與固定于芯片載體上的核酸探針進行雜交,從而檢測雜交熒光信號的強度判斷基因的表達情況。相較于基因組雜交,GEP芯片對生物學意義更為重要的轉(zhuǎn)錄組信息進行檢測,對疾病的診斷與預后判斷具有特殊的意義。目前使用GEP芯片對急性髓細胞白血病、骨髓增生異常綜合征等血液病及神經(jīng)退行性變等進行診斷、分類及預后評估已經(jīng)獲得了令人滿意的效果;

(2)液相芯片:傳統(tǒng)固相芯片將檢測探針錨定于固相載體上捕獲目的序列,而Luminex公司的xMAP技術[10]則通過搭配不同比例的2種紅色熒光染料,將聚苯乙烯微球標記為不同的熒光色,并對其進行編碼得到具有上百種熒光編號的微球。通過xTAG技術將不同的特異性雜交探針交聯(lián)至編碼微球上,使得不同的探針能夠通過微球編碼得以區(qū)分。利用混合后的探針-微球復合物與待測樣本進行雜交,使微球在流動鞘液的帶動下通過紅綠雙色流式細胞儀,其中紅色激光檢測微球編碼,綠色熒光檢測經(jīng)雜交后核酸探針上熒光報告基團的信號強度,一次完成對單個樣本中多種靶序列的同時鑒定。目前,該技術已在囊性纖維化等遺傳性疾病診斷、多種呼吸道病毒鑒定及人乳頭瘤病毒分型取得了廣泛的應用。

2.微流控芯片

1992年Harrison等[11]首次提出了將毛細管電泳與進樣設備整合到固相玻璃載體上構建“微全分析系統(tǒng)”的構想,通過分析設備的微型化與集成化,完成傳統(tǒng)分析實驗室向芯片上實驗室(lab-on-chip)的轉(zhuǎn)變。微流控芯片(microfluidic chip)由微米級流體的管道、反應器等元件構成,與宏觀尺寸的分析裝置相比,其結構極大地增加了流體環(huán)境的面積/體積比,以最大限度利用液體與物體表面有關的包括層流效應、毛細效應、快速熱傳導和**效應在內(nèi)的特殊性能,從而在1張芯片上完成樣品進樣、預處理、分子生物學反應、檢測等系列實驗過程。

目前使用微流控芯片進行指導用藥的多基因位點平行檢測是主要臨床應用領域。

二、核酸序列測定

測序反應是直接獲得核酸序列信息的唯一技術手段,是分子診斷技術的一項重要分支。雖然分子雜交、分子構象變異或定量PCR技術在近幾年已得到了長足的發(fā)展,但其對于核酸的鑒定都僅僅停留在間接推斷的假設上,因此對基于特定基因序列檢測的分子診斷,核酸測序仍是技術上的金標準。

(一)第1代測序

1975年Sanger與Coulson發(fā)表了使用加減法進行DNA序列測定的方法,隨后Maxam在1977年提出了化學修飾降解法的模型,為核酸測序時代的來臨拉開了序幕。

Sanger等于同年提出的末端終止法(Sanger測序法)利用2'與3'不含羥基的雙脫氧核苷三**酸(ddNTP)進行測序引物延伸反應,ddNTP在DNA合成反應中不能形成**酸二酯鍵,DNA合成反應便會終止。如果分別在4個獨立的DNA合成反應體系中加入經(jīng)核素標記的特定ddNTP,則可在合成反應后對產(chǎn)物進行聚丙烯酰胺凝膠電泳(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)及放射自顯影,根據(jù)電泳條帶確定待測分子的核苷酸序列。Appied Biosystems公司在Sanger法的基礎上,于1986年推出了首臺商業(yè)化DNA測序儀PRISM 370A,并以熒光信號接收和計算機信號分析代替了核素標記和放射自顯影檢測體系。該公司于1995年推出的首臺毛細管電泳測序儀PRISM 310更是使測序的通量大大提高。Sanger測序是最為經(jīng)典的一代測序技術,仍是目前獲取核酸序列最為常用的方法。

(二)第2代測序

1.焦**酸測序(Pyro-sequencing)

不同于Sanger測序法所使用的合成后測序理念,Ronaghi分別于1996年與1998年提出了在固相[13]與液相[14]載體中通過邊合成邊測序的方法-焦**酸測序。其基本原理是利用引物鏈延伸時所釋放的焦**酸基團激發(fā)熒光,通過峰值高低判斷與其相匹配的堿基數(shù)量。由于使用了實時熒光監(jiān)測的概念,焦**酸測序?qū)崿F(xiàn)了對特**點堿基負荷比例的定量,因此在SNP位點檢測、等位基因(突變)頻率測定、細菌和病毒分型檢測方面應用廣泛。由于熒光報告原理不同,其對于序列變異的檢測靈敏度從Sanger測序的20%提高到了5%。但由于該技術的儀器采購與單次檢測成本較高,目前尚未得到大規(guī)模的臨床使用。

2.高通量第2代測序

目前常見的高通量第二代測序平臺主要有Roche 454、Illumina Solexa、ABI SOLiD和Life Ion Torrent等,其均為通過DNA片段化構建DNA文庫、文庫與載體交聯(lián)進行擴增、在載體面上進行邊合成邊測序反應,使得第1代測序中最高基于96孔板的平行通量擴大至載體上百萬級的平行反應,完成對海量數(shù)據(jù)的高通量檢測。該技術可以對基因組、轉(zhuǎn)錄組等進行真正的組學檢測,在指導疾病分子靶向治療、繪制藥物基因組圖譜指導個體化用藥、感染性疾病的病原微生物宏基因組鑒定及通過母體中胎兒DNA信息進行產(chǎn)前診斷等方面已經(jīng)取得了喜人的成績。然而,由于該技術需要對DNA進行片段化處理,測序反應讀長較短(如Solexa與SOLiD系統(tǒng)單次讀長僅50bp),需要對數(shù)據(jù)進行大規(guī)模拼接,因此對分子診斷工作者掌握生物信息學知識提出了更高要求,以利于后期的測序數(shù)據(jù)分析。

(三)第3代測序

第3代測序技術的核心理念是以單分子為目標的邊合成邊測序。該技術的操作平臺目前主要有Helicos公司的Heliscope、Pacific Biosciences公司的SMRT和Oxford Nanopore Technologies公司的納米孔技術等。該技術進一步降低了成本,可對混雜的基因物質(zhì)進行單分子檢測,故對SNP、CNV的鑒定更具功效。但是目前其進入產(chǎn)品商業(yè)化,并最終投入臨床應用仍有很長的距離。

三、基于分子構象的分子診斷技術

(一)變性梯度凝膠電泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)與單鏈構象多態(tài)性(single strand conformation polymorphism,SSCP)

1970~1980年間,Fischer等[15]與Orita等[16]分別提出了利用核酸序列變異所導至雙鏈變性條件差異與單鏈空間折疊差異,通過變性與非變性PAGE對變異序列進行分離鑒定的方法,即DGGE與SSCP。上述2項技術均通過變異核酸分子在空間構象上的差異,通過特定條件下電泳速率的變化進行檢測。正因為核酸分子構象具有序列特異性,且對于序列的改變非常敏感,常常1個堿基的變化也能得到鑒定。但由于DGGE與SSCP均必須進行PCR后開蓋電泳的操作,現(xiàn)已不常見于臨床檢測。

(二)變性高效液相色譜(denaturing high-performance liquid chromatography,dHPLC)

1997年,Oefner和Underhill建立[17,18]了利用異源雙鏈變性分離變異序列、使用色譜洗脫鑒定的技術,稱為dHPLC,可自動檢測單堿基置換及小片段核苷酸的**入或缺失。對于存在一定比例變異序列的核酸雙鏈混合物,其經(jīng)過變性和復性過程后,體系內(nèi)將出現(xiàn)2種雙鏈:一種為同源雙鏈,由野生正義鏈-野生反義鏈或變異正義鏈-變異反義鏈構成的核酸雙鏈;另一種為異源雙鏈,即雙鏈中1條單鏈為野生型,而另1條為變異型。由于存在部分堿基錯配的異源雙鏈 DNA與同源雙鏈DNA的解鏈特征不同,在相同的部分變性條件下,異源雙鏈因存在錯配區(qū)而更易變性,被色譜柱保留的時間短于同源雙鏈,故先被洗脫下來,從而在色譜圖中表現(xiàn)為雙峰或多峰的洗脫曲線。由于該技術使用了較高分析靈敏度的色譜技術進行檢測,可快速檢出<5%負荷的變異序列。但需注意的是,由于該技術主要通過異源雙鏈進行序列變異檢測,其不能明顯區(qū)分野生型與變異型的純合子。

(三)高分辨率熔解分析(high-resolution melting analysis,HRMA)

2003年,Wittwer等[19]首次革命性地使用過飽和熒光染料將PCR產(chǎn)物全長進行熒光被動標記,再通過簡單的產(chǎn)物熔解分析對單個堿基變化進行鑒定。該技術的原理也是通過異源雙鏈進行序列變異鑒定。待測樣本經(jīng)PCR擴增后,若存在序列變異雜合子,則形成異源雙鏈,其熔解溫度大大下降。此時由于雙鏈被飽和染料完全填充,其產(chǎn)物熔解溫度的變化便可通過熔解曲線的差異得以判定。對于變異純合子而言,HRMA也可利用其較高的分辨率完成PCR產(chǎn)物單個位點A:T雙鍵配對與G:C三建配對熱穩(wěn)定性差異的鑒定,但是對于Ⅱ、Ⅲ類SNP的純合子變異則無法有效區(qū)分。

如何利用DNA構象對序列進行推測,從而避免成本較高的序列測定或操作繁瑣的雜交反應一直是分子生物學研究與應用的熱點問題。目前,使用構象變化對序列變異進行間接檢測的便捷性已得到一致肯定,尤其是HRMA可完成對變異序列單次閉管的擴增檢測反應。但需要注意的是,由于基于構象變化的分子檢測手段多無法通過探針雜交或核酸序列測定對檢測的特異性進行嚴格的保證,因此其只適合大規(guī)模的初篩,而真正的確診仍需要進行雜交或測序的驗證。

四、定量PCR(quantitative PCR,qPCR)

相比于其他分子診斷檢測技術,qPCR具有2項優(yōu)勢,即核酸擴增和檢測在同一個封閉體系中通過熒光信號進行,杜絕了PCR后開蓋處理所帶來擴增產(chǎn)物的污染;同時通過動態(tài)監(jiān)測熒光信號,可對低拷貝模板進行定量。正是由于上述技術優(yōu)勢,qPCR已經(jīng)成為目前臨床基因擴增實驗室接受程度最高的技術,在各類病毒、細菌等病原微生物的鑒定和基因定量檢測、基因多態(tài)性分型、基因突變篩查、基因表達水平監(jiān)控等多種臨床實踐中得到大量應用。但伴隨著qPCR技術的迅猛發(fā)展,有關這項技術的質(zhì)量管理問題也日益突出,如何消除各類生物學變量所引起的檢測變異,減少或抑制實驗操作與方法學中的各種干擾因素是qPCR技術面臨的難題。

(一)實時熒光定量PCR(real-time PCR)

1.雙鏈摻入法

1992年Higuchi等[20-21]通過在PCR反應液中摻入溴乙錠對每個核酸擴增熱循環(huán)后的熒光強度進行測定,提出了使用熒光強度與熱循環(huán)數(shù)所繪制的核酸擴增曲線,定量反應體系中初始模板的反應動力學(real-time PCR)模型,開創(chuàng)了通過實時閉管檢測熒光信號進行核酸定量的方法。核酸染料可以嵌入DNA雙鏈,且只有嵌入雙鏈時才釋放熒光,在每1次的擴增循環(huán)后檢測反應管的熒光強度,繪制熒光強度-熱循環(huán)數(shù)的S形核酸擴增曲線,以熒光閾值與擴增曲線的交點在擴增循環(huán)數(shù)軸上的投影作為循環(huán)閾值(Cycle threshold,Ct),則Ct與反應體系中所含初始模板數(shù)量呈負指數(shù)關系,推斷初始模板量。隨后Morrison[22]提出了使用高靈敏度的雙鏈染料SYBR Green I進行反應體系中低拷貝模板定量的方法。這一方法操作簡便,但由于僅使用擴增引物的序列啟動核酸擴增,其產(chǎn)物特異性無法得到充分保證。雖然在實時熒光定量PCR反應后可通過熔解曲線對產(chǎn)物特異性進行檢驗,但其特異性明顯遜于使用熒光探針進行檢測,因此雙鏈摻入法并未在臨床實踐中得到認可。

2.Taqman探針

由于雙鏈摻入法存在特異性較低的問題,1996年Heid[23]綜合之前發(fā)現(xiàn)的Taq酶的5'核酸酶活性與熒光共振能量轉(zhuǎn)移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)探針的概念提出了使用Taqman探針進行qPCR的方法。TaqMan探針的本質(zhì)是FRET寡核苷酸探針,在探針的5'端標記熒光報告基團,3'端標記熒光淬滅基團,利用Taq酶具有5'3'外切酶活性,在PCR過程中水解與靶序列結合的寡核苷酸探針,使熒光基團得以游離,釋放熒光信號。從而使能夠與靶序列雜交的探針在擴增過程中釋放熒光,通過real-time PCR的原理對其進行定量。由于其超高的特異性與成功的商品化**,Taqman探針已經(jīng)成為目前臨床使用最為廣泛的qPCR方法,其在各種病毒基因定量檢測、基因分型、腫瘤相關基因表達檢測等方面具有著不可替代的地位。

3.分子信標

同樣在1996年,Tyagi等[24] 提出了使用分子信標(moleuclar beacons)進行qPCR的方法,分子信標是5'與3'端分別標記有熒光報告基團與淬滅基團的寡核苷酸探針,其兩端具有互補的高GC序列,在qPCR反應液中呈發(fā)夾結構,熒光基團與淬滅基團發(fā)生熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)而保持靜息狀態(tài)。當PCR反應開始后,莖環(huán)結構在變性高溫條件下打開,釋放熒光;在退火過程中,靶序列特異性探針則與模板雜交保持線性,不能與模板雜交的探針則復性為莖環(huán)結構而熒光淬滅,通過檢測qPCR體系中退火時的熒光信號強度,便可以real-time PCR原理特異性檢測體系中的初始模板濃度。相比于Taqman探針,分子信標使用發(fā)卡結構使熒光基團與淬滅基團在空間上緊密結合,大大降低了檢測的熒光背景,其檢測特異性較Taqman探針更高,更適合等位基因的分型檢測。

4.雙雜交探針

1997年,Wittwer等[25]發(fā)表了使用分別標記熒光供體基團與熒光受體基團的2條相鄰寡核苷酸探針進行qPCR的方法。雙雜交探針所標記的供體基團和受體基團的激發(fā)光譜間具有一定重疊,且2條探針與靶核酸的雜交位置應相互鄰近。僅當2條探針與靶基因同時雜交時,供體與受體基因得以接近,從而通過FRET發(fā)生能量傳遞,激發(fā)熒光信號,熒光信號強度與反應體系中靶序列DNA含量呈正比。由于使用了2條探針進行靶序列雜交,該方法的特異性比傳統(tǒng)單探針檢測體系得到了極大地提升。

(二)數(shù)字PCR

早在上世紀90年代就出現(xiàn)了使用微流控陣列對單次qPCR反應進行分散檢測的概念?；谶@一理念,Vgelstein與Kinzter[26]于1999年發(fā)表了數(shù)字PCR(digital PCR)的方法,對結腸癌患者糞便中的微量 K-RAS基因突變進行了定量。相比于傳統(tǒng)的qPCR方法,數(shù)字PCR的核心是將qPCR反應進行微球乳糜液化,再將乳糜液分散至芯片的微反應孔中,保證每個反應孔中僅存在≤1個核酸模板。經(jīng)過PCR后,對每個微反應孔的熒光信號進行檢測,存在靶核酸模板的反應孔會釋放熒光信號,沒有靶模板的反應孔就沒有熒光信號,以此推算出原始溶液中待測核酸的濃度。因此,數(shù)字PCR是1種檢測反應終點熒光信號進行絕對定量的qPCR反應,而非以模板Ct值進行核酸定量的real-time PCR。

經(jīng)由Quantalife公司開發(fā)(已于2011年被BIO-RAD收購)的微滴式數(shù)字PCR是首款商品化的數(shù)字PCR檢測系統(tǒng),目前已被廣泛運用于微量病原微生物基因檢測、低負荷遺傳序列鑒定、基因拷貝數(shù)變異與單細胞基因表達檢測等多個臨床前沿領域。與傳統(tǒng)qPCR相比較,該技術具有超高的靈敏度與精密度,使其成為目前qPCR領域的新星。

五、對未來5年的展望

半個世紀以來分子診斷的高速發(fā)展離不開分子生物學技術日新月異的進步。概而言之,在過去的50年中分子診斷技術取得了三大轉(zhuǎn)化與3項提升:即報告信號檢測從放射核素標記向熒光標記轉(zhuǎn)化,操作方法由手工操作向全自動化轉(zhuǎn)化,檢測分析通量從單一標志物向高通量多組學聯(lián)合判斷轉(zhuǎn)化;檢測靈敏度、精密度、特異性的快速提升。

在未來5年中,我國分子診斷事業(yè)將迎來兩方面的進步。隨著衛(wèi)生監(jiān)管部門對分子診斷重要性的認識不斷深入與越來越多高學歷、高素質(zhì)人才的進入,分子診斷將會出現(xiàn)理念的革命性進步,高通量技術將更多的進入臨床的實際應用中。隨著技術的進一步發(fā)展,傳統(tǒng)針對特定基因異常、病原微生物感染鑒定的方法學,也將在檢測的各項分析性能與操作便捷程度上取得長足的進步。對于傳統(tǒng)人力與時間成本較高的檢測方法學,將出現(xiàn)兩極分化的態(tài)勢,即Southern等經(jīng)典的檢測金標準將得到保留;而ASO-RDB等靈敏度、特異性均不能滿足實際臨床需求的方法將快速被新型技術所取代。最終,分子診斷也必將一改目前僅僅用于病原微生物基因檢測與部分遺傳性疾病診斷的局面,形成由腫瘤學、遺傳學、微生物學、藥物基因組學四足鼎立,快速發(fā)展的景象。

打開APP閱讀更多精彩內(nèi)容

聲明：本文內(nèi)容及配圖由入駐作者撰寫或者入駐合作網(wǎng)站授權轉(zhuǎn)載。文章觀點僅代表作者本人，不代表電子發(fā)燒友網(wǎng)立場。文章及其配圖僅供工程師學習之用，如有內(nèi)容圖片侵權或者其他問題，請聯(lián)系本站作侵刪。侵權投訴

芯片

DNA

回顧手機攝像頭的發(fā)展歷程

2021-01-262937

新冠**引爆分子診斷市場,2020年全球分子診斷市場將超過150億美元

2020-11-051713

人工智能在分子診斷市場有怎樣的應用

2020-01-16976

帶你了解一下什么是USB 3.1接口

2019-09-237122